WWW.OS.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Научные публикации
 

«отзыв официального оппонента на диссертационную работу И ванова Александра Владимировича “ Разработка аналитических ...»

1

отзыв

официального оппонента на диссертационную работу И ванова Александра

Владимировича “ Разработка аналитических методов фракционного

исследования гомоцистеина и других аминотиолов плазмы крови для

оценки ишемических повреждений головного мозга”, представленную на

соискание ученой степени кандидата медицинских наук в

Диссертационный совет Д 001.003.01 при Федеральном государственном

бюджетном научном учреждении “ Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии” по специальностям 14.03.03 патологическая физиология и 03.01.04 - биохимия.

А ктуальность проблемы и темы диссертации. Работа Иванова А.В.



посвящена актуальной проблеме, связанной с разработкой и апробацией новых аналитических методов изучения метаболизма аминотиолов в биологических жидкостях, а также - внедрением этих методов в практику экспериментальных исследований, в том числе - при моделировании острого нарушения мозгового кровообращения у животных. Цель исследования заключалась в разработке новых подходов для решения задач, требующих знания состава аминотиолов одной из важнейших редокс-систем организма в условиях ишемического повреждения головного мозга. Отсюда очевидна актуальность для современной биохимии и патофизиологии разработки и внедрения в экспериментальную практику методов определения редокс-статуса аминотиолов, делающих возможным ранее выявление, мониторинг динамики состояния организма и определение прогноза ишемической альтерации головного мозга.

Оценка содержания исследования и полученных результатов.

Диссертационной работа построена по традиционному плану. Она состоит из введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов, результатов исследования, их обсуждения, выводов, заключения и списка цитируемой литературы, включающего 322 наименования, из которых 41 отечественное. Работа изложена на 127 страницах, иллюстрирована 30 рисунками и 7-ю таблицами.

Во введении автор обосновывает актуальность проблемы, определяет цель работы и формулирует задачи, решению которых посвящено диссертационное исследование.

В обзоре литературы анализируются современные представления о метаболизме гомоцистеина, системе аминотиолов в целом и о её роли в развитии окислительного стресса и эндотелиальной дисфункции как ключевых звеньев патогенеза ишемического повреждения головного мозга. Особое внимание уделено механизмам цитотоксичности гомоцистеина, вызывающего прямую модификации белков (путем их гомоцистеинилирования).

Вместе с тем, учитывая важную роль в этом механизме аминотиолов, ожидалось, что вопросы регуляции метионинового цикла, оценка роли таких метаболитов как S-аденозилгомоцистеин, S-аденозилметионин, тиолактон гомоцистеина в окислительном стрессе, эндотелильной дисфункции будут изложены более полно.

В обзоре литературных данных подробно описаны современные подходы к анализу аминотиолов с использованием методов жидкостной хроматографии и капиллярного электрофореза с учетом сложностей в выборе дериватизирующих реагентов. Несмотря на то, что обсуждение этих вопросов представляется, на первый взгляд, весьма далеким от специальностей диссертации, их решение является необходимым этапом работы. Это аргументируется и тем, что разрабатываемые автором подходы планируется внедрять в клинико-лабораторную диагностику.

В главе “ О бщ ая характеристика экспериментального материала и дизайн исследования” автором описаны экспериментальные модели гипергомоцистеинемии, а также локальной и глобальной ишемии головного мозга у крыс.

К сожалению, в этом разделе не указаны конечные объемы кровопотери, а это, как показало само исследование, может иметь важное значение для интерпретации полученных результатов.

Оригинальными являются методические подходы А.В. Иванова к определению общего уровня гомоцистеина методами капиллярного электрофореза и масс-спектрометрии (КЭ-МС), а его фракций - методами КЭУФ и ВЭЖХ-МС, а также оптимизация известного метода ВЭЖХ-УФ с предколоночной дериватизацией реагентом Эллмана для определения восстановленных форм тиолов.

Г л ава “ Результаты и обсуждение” включает в себя пять разделов, посвященных разработке аналитических методов а также их обсуждение.

Автором охарактеризованы четыре разнообразных подхода, имеющих как преимущества для лабораторной диагностики, так и ограничения.

Небезынтересным представляется оригинальный подход автора к анализу связанных форм тиолов с помощью капиллярного электрофореза. Этот метод может быть использован для изучения пост-трансляционных модификаций связанных тиолов.

Разработанные А.В. Ивановым методы хромато-масс-спектрометрии и капиллярного электрофореза выполнены на высоком технологическом уровне.

Следует отметить, что эти методы наиболее чувствительны в своем классе.

Основное внимание в работе уделено хроматографическому анализу восстановленных форм аминотиолов с использованием УФ-детектора.

Оптимизация этого метода также позволила достичь высокой чувствительности, а учет нежелательных реакций дериватизации - значительно увеличить стабильность анализа. В связи с простотой проведения анализа, высокой воспроизводимостью и доступностью оборудования этот метод был выбран для анализа тиолов в экспериментальных моделях гипергомоцистеинемии и ишемии головного мозга.

Автором исследованы также изменения основных низкомолекулярных аминотиолов плазмы при экспериментальном моделировании двух вариантов ишемии головного мозга у крыс.





Первый вариант: фокальная ишемия, достигался введением нити в просвет среднемозговой артерии и второй:

глобальная ишемия мозга - путем пережатия сонных артерий на 10 мин как с сопутствующей кровопотерей (около трети ОЦК), так и без неё.

В работе впервые выявлены прогрессирующие изменения гомеостаза аминотиолов плазмы и доказан системный характер этих изменений. Именно это определяет актуальность дальнейшего изучения механизмов регуляции гомеостаза системы аминотиолов и дает основания исследовать эту систему как маркер острых нарушений кровообращения.

Вы воды диссертации аргументированы, соответствуют цели и задачам исследования; они достоверны, т.к. основаны на достаточном фактическом материале и его статистическом анализе.

А втореф ерат отражает текст диссертации и её основные положения.

Указанные выше замечания не снижают общей высокой оценки диссертационной работы.

По материалам исследования опубликовано 9 печатных работ, в том числе 5 - в рецензируемых научных журналах, входящих в перечень ВАК и 2-е тезисов докладов на Всероссийских конференциях. Материалы публикаций соответствуют содержанию диссертации.

Научная новизна результатов и вы водов работы. Автором диссертации разработан и усовершенствован комплекс методов анализа различных форм аминотиолов, отличающихся как по возможностям, так и по чувствительности. Методы, предлагаемые автором диссертации, характеризуются высокой чувствительностью при использовании ВЭЖХ-УФ, а также обеспечивают увеличение стабильности проб для анализа и, тем самым его достоверности. Такой подход позволил А.В. Иванову провести исследование редокс состояния аминотиолов в условиях моделирования гипергомоцистеинемии и локального ишемического инсульта у крыс. Это сделало возможным выявлять эффекты и закономерности, которые невозможно однозначно оценить при традиционном исследовании общего содержания аминотиолов.

Результаты работы показали, что в системе восстановленных тиолов происходят существенные изменения, которые, однако, не обнаруживаются при определении их общего уровня.

Автором диссертационной работы впервые:

- разработан метод прямого определения общего уровня гомоцистеина плазмы крови с использованием капиллярного электрофореза в сопряжении с масс-спектрометрией;

- применен метод капиллярного электрофореза для анализа форм гомоцистеина, цистеина и цистеинилглицина (связанных с белками плазмы крови) по их циклическим 8,1Ч-тиокабонильным производным;

- предложен хромато-масс-спектрометрический метод анализа фракций и общего содержания гомоцистеина плазмы крови;

- показана высокая эффективность использования N-этилмалеимида в качестве блокатора побочных реакций дисульфидного обмена при анализе восстановленных форм аминотиолов с их дериватизацией реактивом Эллмана (дитиобиснитробензойной кислотой);

доказано, что индуцированная метиониновой нагрузкой гипергомоцистеинемия у крыс сопровождается увеличением не только общего уровня аминотилов в плазме крови, но и повышением их редоксстатуса, что отличает её от гипергомоцистеинемий, наблюдаемых при сердечно-сосудистых заболеваниях и почечной недостаточности;

- выявлено, что при локальной и глобальной ишемии головного мозга у крыс, сочетающейся скровопотерей, происходит быстрое и значительное (в 5-15 раз) падение редокс-статуса основных аминотилов (цистеина, гомоцистеина, глутатиона) в плазме крови, чем без кровопотери.

б Практическое значение результатов работы. Разработанные автором методы определения общего содержания гомоцистеина и его связанной фракции могут использоваться вместо традиционного метода ИФА, что обеспечивается преимуществами капиллярного электрофореза (производительность, экономичность, воспроизводимость). Также следует отметить, что оборудование для КЭ, в отличие от ИФА наборов, производится в России. В работе показано, что редокс-статус аминотиолов плазмы крови может выступать чувствительным показателем ишемии головного мозга и, таким образом, использоваться для мониторинга и прогноза течения ишемических инсультов.

Внедрение результатов исследования. Разработанные автором работы методы внедрены в экспериментальную практику, а также - в систему послевузовской подготовки курсантов-врачей лабораторного профиля Российской медицинской академии последипломного образования.

Заключение Диссертация Иванова Александра Владимировича: “Разработка аналитических методов фракционного исследования гомоцистеина и других аминотиолов плазмы крови для оценки ишемических повреждений головного мозга”, выполненная под руководством доктора медицинских наук, академика РАН профессора Кубатиева А.А. и доктора химических наук, профессора Лузянина Б. П., представляет собой законченное научно-квалификационное исследование, в котором разработаны и обоснованы новые методы выявления низкомолекулярных аминотиолов в плазме крови; описаны закономерности их изменений на экспериментальных моделях ишемии головного мозга; впервые продемонстрировано резкое и значительное снижение редокс-статуса этой системы в остром периоде ишемии головного мозга.

Диссертационная работа Иванова А.В. по актуальности, научной новизне и практической значимости соответствует основным требованиям п.

9 положения «О порядке присуждения ученых степеней», утвержденного

–  –  –

Литвицкий Петр Францевич, профессор, член-корреспондент РАН, доктор медицинских наук по специальности 14.03.03 - патологическая физиология.



Похожие работы:

«Вольф ШНАЙДМАН, Мария МАРКОВИЧ Соломон Ваксман: Бог создал лекарства из земли В 2008 году исполняется 120 лет со дня рождения выдающегося амери канского ученого микробиолога, про фессора университета штата Нью Джерси — Ратджерс, лауреата Нобе левской премии Зелмана Абрахама Ваксмана. Замечательного ученого хорошо знает научный мир, но знают ли его одесситы, жители города, давшего пу тевку в жизнь будущему лауреату? Мы постараемся помочь вам узнать как можно больше о выдающемся уче ном,...»

«УДК 581.1 Бюллетень Общества физиологов растений России. – Москва, 2015. Выпуск 31. – 76 с. Ответственный редактор чл.-корр. РАН Вл. В. Кузнецов Редакционная коллегия: к.б.н. В. Д. Цыдендамбаев, к.б.н. Н. Р. Зарипова, н.с. Л. Д. Кислов, м.н.с. У. Л. Кислова © Общество физиологов растений России, 2015 © Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физиологии растений им. К.А. Тимирязева РАН, 2015 Юбилеи 125 лет ИНСТИТУТУ ФИЗИОЛОГИИ РАСТЕНИЙ им. К.А. ТИМИРЯЗЕВА РОССИЙСКОЙ...»

«А.Н. ГЛЕБОВ Е.В. ШУЛЬГА В.В. ЗИНЧУК РОЛЬ КИСЛОРОДСВЯЗЫВАЮЩИХ СВОЙСТВ КРОВИ В РАЗВИТИИ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА, ИНДУЦИРОВАННОГО ЛИПОПОЛИСАХАРИДОМ Монография Под редакцией Зинчука В.В. Гродно ГрГМУ УДК 612.23:542.943-92’78:579.84 ББК 28.91 Г 53 Рекомендовано Редакционно-издательским советом УО «ГрГМУ» (протокол № 3 от 21.04.2011 г.). Авторы: нач. каф. воен. эпидемиологии и воен. гигиены УО «БГМУ», канд. мед. наук, доц. А.Н. Глебов; канд. мед. наук, ассист. каф. нормальной физиологии УО «ГрГМУ»...»

«Ю.А. ОРЛОВ ГИДРОЦЕФАЛИЯ КИЕВ-1995 ОГЛАВЛЕНИЕ Оглавление Введение Эмбриогенез и анатомия ликворосодержащих Физиология ликвороциркуляции. Классификация гидроцефалии Диагностика гидроцефалии Возрастные особенности диагностики гидроцефалии. Диагностика гидроцефалии у новорожденных и детей грудного возраста. Диагностика гидроцефалии у детей старшего возраста и у взрослых. Лечение гидроцефалии Техника вентрикуло-перитонеального шунтирования. Техника вентрикуло атриарного шунтирования Конструктивные...»

«1. Цели освоения модуля (дисциплины) Цели освоения дисциплины: формирование у обучающихся представлений о человеке как о части природы, о единстве и ценности всего живого и невозможности выживания человечества без сохранения биосферы. Дисциплина «Экология» должна обучить грамотному восприятию явлений, связанных с жизнью человека в окружающей среде, в том числе и с его профессиональной деятельностью.2. Место дисциплины в структуре ООП Дисциплина (модуль) «Экология» относится к базовой части...»





Загрузка...


 
2016 www.os.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Научные публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.