WWW.OS.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Научные публикации
 

«Н. С. Кирабаев ОТЗЫВ ведущей организации на диссертацию Овчинникова Руслана Константиновича «Создание и характеристика ...»

«УТВЕРЖДАЮ»

Проректор по научной работе

Ф ГАСЖ Ж ) «Российский

ужбы народов»

Н. С. Кирабаев

ОТЗЫВ

ведущей организации на диссертацию Овчинникова Руслана Константиновича «Создание

и характеристика новой трансгенной модели бокового амиотрофического склероза,

основанной на нейроспецифической экспрессии патогенной формы белка FUS»,

представленную на соискание ученой степени кандидата медицинских наук по

специальности 14.03.03 - Патологическая физиология Актуальность темы выполненной работы Боковой амиотрофичечкий склероз (БАС) является третьим по частоте встречаемости нейродегенеративным заболеванием во всем мире, и на сегодняшний день методы эффективной терапии и ранней диагностики этого заболевания отсутствуют.



Недавно проведенные широкомасштабные медико-генетические исследования позволили ассоциировать ряд наследственных форм БАС с мутациями в генах, кодирующих ДНК/РНК-связывающие белки, в частности белок FUS. В определенных условиях аберрантная форма данного белка способна менять внутриклеточную компартментализаию, агрегировать и формировать патогистологические включения, которые накапливаются в нейронах. Изучение патологии метаболизма РНК, в регуляцию которого вовлечен белок FUS, является в настоящий момент центральным предметом многочисленных исследований молекулярных механизмов специфического поражения двигательных нейронов. В данной диссертационной работе впервые получены прямые доказательства центральной роли FUSonaTnn в развитии нейродегенеративного процесса, характеризующегося специфической потерей двигательных нейронов. Этим определяется исключительная важность исследования Р.К. Овчинникова, и, таким образом, представленная работа является, безусловно, актуальной.

Для выполнения поставленных в работе задач диссертантом использован оригинальный подход и применены современные технологии. Данное диссертационное исследование посвящено разработке и характеристике новой трансгенной мышиной модели бокового амиотрофического склероза, основанной на экспрессии аберрантной формы белка FUS человека в нервной системе.

Диссертация Р.К. Овчинникова написана по общепринятому традиционному плану и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы, который включает 280 источников. Диссертационная работа изложена на 159 страницах, содержит 30 рисунков и 3 таблицы. В разделе «Общая характеристика работы» в сжатой форме представлены основные аспекты научной проблемы, которой посвященадиссертационная работа, обоснованы и сформулированы цели и задачи проведенного исследования.

Во введении в сжатой форме представлены основные аспекты научной проблемы, которой посвящена диссертационная работа, а также цели и задачи проведенного исследования. При выполнении диссертационной работы автор собрал и умело проанализировал большой объем литературы. Обзор литературы состоит из пяти глав. В первых двух главах автор приводит общие данные о боковом амиотрофическом склерозе, а также описывает клинические признаки, характерные для различных форм данного заболевания. В третьей главе подробно описаны генетические факторы развития бокового амиотрофического склероза, а в четвертой проводится характеристика основных типов белковых включений, которые детектируют в аутопсийном материале, полученном от пациентов. Несомненный интерес представляет пятая глава обзора литературы, где, на основе результатов недавних исследований, подробно разобраны патогенетические пути развития БАС, в центре каждого из которых лежит определенный тип протеинопатии, среди них особое внимание автором уделено FUS-ассоциированным патологическим процессам. Эти данные потом логично грамотно использованы автором в последующих разделах для интерпретации и обсуждения собственных результатов. В целом обзор литературы производит благоприятное впечатление и хорошо готовит читателя к восприятию основной части диссертационной работы Р.К. Овчинникова.

Глава «Материалы и методы» данной работы включает широкий набор методов, необходимых для решения поставленных задач. Подробно описана схема получения новой трансгенной линии, а также детально описаны биохимичекие, гистологичесие и инструментальные методы, использовавшиеся для ее характеристики. Набор методов разнообразен и достаточен для решения поставленных экспериментальных задач.

Глава «результаты и их обсуждение» состоит из семи разделов, в которых автором представлены полученные экспериментальные данные и проведено тщательное обсуждение грамотно документированных результатов исследования. На первом этапе выполнения диссертации была проведена довольно трудоемкая работа - получение линии трасгенных мышей, экспрессирующих укороченную форму белка FUS человека 1-359.

Впечатляет объем проделанной работы - было пересажено около тысячи ранних эмбрионов мыши, отобранных после микроинъекций рекомбинантной ДНК, в результате чего были получены основные производители, способные передавать трансгенную кассету потомству. Была создана колония мышей, от которых в последствии получали материал для дальнейшего биохимического и гистологического анализа. Специфическая экспрессия аберрантного белка в тканях головного и спинного мозга трансгенных животных была подтверждена методом иммуноблоттинга с использованием специфических антител против N-концевого участка белка FUS человека. Кроме того, в данной главе представлены результаты фенотипического анализа.





Вторая глава посвящена патогистологической характеристике, исследуемой протеинопатии в спинном мозге модельных животных. В результате гистологического исследования были выявлены детергент-нерастворимые FUS-реактивные включения в спинном мозге Thy-1/FUS 1-359 мышей часть из которых была убиквитинирована. Кроме того, в составе таких патологических депозитов был обнаружен и эндогенный белок FUS мыши, что является результатом его индуцированной агрегации. Таким образом, автор доказал, что в данной модельной линии животных удалось воспроизвести биохимический механизм БШопатии, лежащий в основе развития и прогрессии нейродегенеративного процесса со специфическим поражением двигательных нейронов.

Третья глава посвящена исследованию динамики гибели а-мотонейронов передних рогов спинного мозга трансгенных животных на различных стадиях модельного заболевания. Были проведены подсчет количества и морфометричекая характеристика амотонейронов на выбранном участке поясничного отдела спинного мозга. Была показана прогрессирующая в процессе развития заболевания гибель а-мотонейронов, при этом общее число нейрональных клеток оставалось неизменным.

В четвертой части проведено исследование повреждения проводящих путей и нервно-мышечных синапсов. Было показано, что изменения в передних корешках у трансгенных мышей на симптоматической стадии заболевания выражены гораздо существеннее, чем в корешках, отвечающих за проведение афферентного сигнала. Далее при помощи двойного иммунно-гистохимического окрашивания было выявлены многочисленные случаи потери нейромышечного контакта у Thy-1/FUS 1-359 мышей, находящихся на развитой симптоматической стадии модельного заболевания. Также в этой главе приведена оценка степени выраженности нейровоспалительной реакции. В результате проведенного исследования в зоне передних рогов спинного мозга у трансгенных животных линии Thy-1/FUS 1-359 на развитой симптоматической стадии заболевания был выявлен выраженный реактивный астроглиоз. У животных дикого типа из тех же пометов подобных изменений не отмечалось. Кроме того, в препаратах трансгенных животных, находящихся на симптоматической стадии заболевания, было выявлено большое число амебоидных микроглиоцитов.

В пятой части проведен анализ уровня нейротрофического фактора BDNF, играющего важную роль в функционировании нейронов и регуляции процессов иннервации клеток-мишеней. На поздней пресимптоматической стадии модельного заболевания количество BDNF было достоверно снижено у Thy-1/FUS 1-359 мышей, однако на терминальной стадии статистически достоверного снижения уровня BDNF уже не наблюдалось.

В шестой главе приведены данные о прогрессии модельного заболевания. На предварительно отобранных экспериментальных группах животных при помощи инструментальных методов было проведено выявление нарушения показателей моторной функции до визуальной регистрации. Была описана динамика прогрессии моторной дисфункции в процессе развития модельного заболевания, а также отработана схема тестирования, которая может рутинно использоваться при проведении доклинических испытаний и оценки специфической активности нейропротекторных препаратов на данной трансгенной мышиной линии.

В седьмой главе представлены данные анализа некоторых показателей регенеративного процесса, в спинном мозге модельных животных. С целью исследования интенсивности нейрогенеза в спинном мозге мышей линии Thy-1/FUS 1-359 был использован метод мечения делящихся клеток 5-бром-2'-дезоксиуридином (BrdU). Было показано, что в спинном мозге трансгенных мышей на досимптоматической стадии развития заболевания содержится значительно меньшее число BrdU-положительных клеток, чем у контрольных нетрансгенных животных из тех же пометов.

В представленной диссертационной работе была получена и охарактеризована новая трансгенная мышиная линия Thy-1/FUS 1-359. Впервые была показана ключевая роль FUSonaTHH в патогенезе нейродегенеративных заболеваний. Доказано, что созданная трансгенная модель может быть использована в качестве модели бокового амиотрофического склероза. Эти абсолютно оригинальные данные определяют научную новизну исследования.

Завершая анализ диссертационной работы Р.К. Овчинникова, можно заключить, что это логически выстроенное исследование является законченным научноисследовательским трудом, посвященным актуальной и важной проблеме. Структура диссертации традиционна, её объём отвечает всем требованиям, предъявляемым к диссертационным работам на соискание ученой степени кандидата медицинских наук.

Цель и задачи диссертационной работы Р.К. Овчинникова сформулированы корректно.

Материал чётко изложен с соответствующими иллюстрациями и схемами, работа хорошо обоснована анализом современной литературы и характеризует автора, как зрелого исследователя. Работа выполнена с использованием современных биохимических, молекулярно-биологических и гистологических методов, а также инструментальных методов анализа моторной функций животных. Все выбранные методы адекватны задачам исследования. Полученные в работе выводы обоснованы, соответствуют поставленным задачам и полностью согласуются с данными экспериментов. Автореферат полностью отражает материалы диссертационной работы. Все основные результаты диссертации опубликованы в 12 научных работах, в том числе, в 4 научных статьях.

Замечания В качестве замечания можно указать, что работа выигрывала при включении в анализ данных электромиографического исследования, позволившего бы дополнительно оценить характер и степень выраженности нервно-мышечного аппарата. Однако указанное замечание несет частныйхарактер и нисколько не снижает положительную данной работы.

Помимо теоретического значения диссертационная работа представляет практический интерес. Охарактеризованная в работе трансгенная мышиная линия может быть использована в качестве модели для исследования соединений при дальнейшей разработке лекарственных препаратов нового поколения для коррекции нейродегенеративных процессов, в патогенезе которых принципиально важную роль играет агрегация белка FUS.

Рекомендации по использованию результатов Основные результаты работы могут найти применение и дальнейшее развитие в научных учреждениях медицинского и биологического профилей: Российском национальном исследовательском медицинском университете имени Н.И. Пирогова, Московской медицинской академии имени И.М. Сеченова, Центре психического здоровья, ФГБУ Институте молекулярной биологии имени В. А. Энгельгардта РАН, ФГБУ Институте биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича РАМН, ФГБУ «НИИ общей патологии и патофизиологии» РАМН, а также профильных клинических центрах, в которых проводятся медицинские исследования и лечение нейродегенеративных заболеваний.

Заключение.

Таким образом, диссертационная работа Р.К. Овчинникова «Создание и характеристика новой трансгенной модели бокового амиотрофического склероза, основанной на нейроспецифической экспрессии патогенной формы белка FUS» является законченной научно-квалификационной работой, в результате которой была получена новая трансгенная линия мышей Thy-1/FUS 1-359, а также впервые проведена ее характеристика. Впервые были получены убедительные доказательства центральной роли FUSonaTHH в развитии нейродегенеративного процесса, что имеет существенное значение для биомедицинской науки.

Данная диссертационная работа отвечает требованиям пункта 7 Положения ВАК «О порядке присуждения ученых степеней», утвержденного Постановлением Правительства РФ, предъявляемым к кандидатским диссертациям, а ее автор,Овчинников Руслан Константинович заслуживает присуждения искомой степени кандидата медицинских наук по специальности 14.03.03 - Патологическая физиологии Отзыв на диссертацию обсужден и утвержден на заседании кафедрой общей патологии и патологической физиологии медицинского института ФГАОУ ВО «РУДН»

14.10. 2015 года, протокол No 3.

Отзыв ведущей организации подготовили:

профессор кафедры общей патологии и патологической физиологии медицинского института ФГАОУ ВО «РУДН»; д.м.н.

Заведующий кафедройобщей патологии и патологической физиологии медицинского института ФГАОУ ВО «РУДН»

заслуженный деятель науки РФ, д.м.н., профессор В.А.Фролов

–  –  –





Похожие работы:

«СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ НАУКИ Шаманин Владимир Петрович – доктор сельскохозяйственных наук, профессор, профессор кафедры селекции, генетики и физиологии растений, ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А. Столыпина, 644008, г. Омск, Институтская площадь, 1, тел.: (3812) 65-12-66, e-mail: vpshamanin@rambler.ru. Петуховский Сергей Львович – кандидат сельскохозяйственных наук, доцент, ректор ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А. Столыпина, 644008, г. Омск, Институтская площадь, 1; тел. (3812) 65-11-46, e-mail:...»

«УДК 581.1 Бюллетень Общества физиологов растений России. – Москва, 2015. Выпуск 31. – 76 с. Ответственный редактор чл.-корр. РАН Вл. В. Кузнецов Редакционная коллегия: к.б.н. В. Д. Цыдендамбаев, к.б.н. Н. Р. Зарипова, н.с. Л. Д. Кислов, м.н.с. У. Л. Кислова © Общество физиологов растений России, 2015 © Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физиологии растений им. К.А. Тимирязева РАН, 2015 Юбилеи 125 лет ИНСТИТУТУ ФИЗИОЛОГИИ РАСТЕНИЙ им. К.А. ТИМИРЯЗЕВА РОССИЙСКОЙ...»

«Вестник КрасГАУ. 20 15. №10 УДК 582.087:573.11:378.4 (477.75) И.С. Казакова ИНТРОДУКЦИЯ ВИДОВ РОДА ХОСТА (HOSTA TRATT.) В ПРЕДГОРНОМ КРЫМУ Проведена оценка успешности интродукции видов рода Hosta Tratt. в условиях Предгорной зоны Крыма. Выявлены перспективные виды для внедрения в зеленое строительство региона. Впервые рассчитан физиологический ноль для 5 видов хост: Hosta sieboldii (Paxton) Ingram, Hosta ventricosa Stearn, Hosta sieboldiana (Hooker) Engler, Hosta rectifolia Nakai, Hosta...»

«СВЕДЕНИЯ О РЕЗУЛЬТАТАХ ПУБЛИЧНОЙ ЗАЩИТЫ в диссертационном совете Д 001.036.01 на базе Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт кардиологии» Терешенкова Екатерина Константиновна «Механика левого желудочка у больных артериальной гипертонией; связь с суточным профилем артериального давления» по специальностям 14.01.05 – кардиология, 14.03.03 – патологическая физиология (медицинские науки) На основании защиты диссертации и результатов тайного...»

«Вестник КрасГАУ. 20 15. №10 УДК 582.087:573.11:378.4 (477.75) И.С. Казакова ИНТРОДУКЦИЯ ВИДОВ РОДА ХОСТА (HOSTA TRATT.) В ПРЕДГОРНОМ КРЫМУ Проведена оценка успешности интродукции видов рода Hosta Tratt. в условиях Предгорной зоны Крыма. Выявлены перспективные виды для внедрения в зеленое строительство региона. Впервые рассчитан физиологический ноль для 5 видов хост: Hosta sieboldii (Paxton) Ingram, Hosta ventricosa Stearn, Hosta sieboldiana (Hooker) Engler, Hosta rectifolia Nakai, Hosta...»





 
2016 www.os.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Научные публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.